In vitro equivalence assessment of rivaroxaban tablets

Full Text

Введение

Тромботические заболевания и осложнения остаются одной из ведущих причин смертности и инвалидности в странах с высоким уровнем дохода, а в странах со средним и низким уровнем дохода возрастают эпидемиологические показатели (заболеваемость и распространенность) [1, 2]. Появление прямых оральных антикоагулянтов (ПОАК) в клинической практике врачей разных специальностей расширило возможности антикоагулянтной терапии. В настоящее время ПОАК используются для профилактики инсульта при неклапанной фибрилляции предсердий, лечения и профилактики венозных тромбоэмболий, а также в качестве тромбопрофилактики после крупных травматологических и ортопедических операций. Для ривароксабана дополнительно показана возможность применения для профилактики атеротромботических осложнений у пациентов с ишемической болезнью сердца и заболеваниями периферических артерий [3].

Критериями эффективности ривароксабана в клинических исследованиях служат снижение риска сердечно-сосудистых событий (инфаркта миокарда, инсульта и смерти от сердечно-сосудистых заболеваний), а также частоты тромбоэмболических осложнений [4, 5]. Лабораторные методы контроля терапии ПОАК имеют ограниченное использование в рутинной клинической практике [6].

С декабря 2024 г. в связи с окончанием срока патентной защиты оригинального препарата ривароксабана (Ксарелто®, Bayer AG, Германия) на российский фармацевтический рынок вышло одновременно более 45 его воспроизведенных препаратов под различными торговыми наименованиями. Они отличаются формой (микронизированная и немикронизированная) и происхождением активной фармацевтической субстанции, составом вспомогательных веществ и дозировками (2,5, 10, 15 и 20 мг). В то же время различия между оригинальным и воспроизведенным препаратами, такие как характеристики используемых активных фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ и примесей, способны влиять на эффективность и безопасность препаратов, в том числе за счет влияния на высвобождение действующего вещества из готовой лекарственной формы [7, 8].

Определение эквивалентности воспроизведенных лекарственных средств может быть осуществлено через традиционные, достаточно длительные и затратные испытания in vivo и посредством процедуры «биовейвер», которая, в соответствии с нормативными документами РФ, использует in vitro тест сравнительной кинетики растворения (ТСКР) [9, 10].

В связи с этим представляет практический интерес сравнение воспроизведенных препаратов ривароксабана, содержащих микронизированную (ЛП 1 – Арриксардо, ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Россия) и немикронизированную (ЛП 2 и ЛП 3) фармацевтическую субстанцию, по результатам данных, полученных в ходе проведения ТСКР.

Цель исследования – оценка эквивалентности in vitro в тесте ТСКР оригинального и некоторых воспроизведенных препаратов ривароксабана, представленных на российском фармацевтическом рынке.

Материалы и методы

Объектами исследования стали таблетки ривароксабана, покрытые пленочной оболочкой, в дозировках 2,5, 10, 15 и 20 мг: Ксарелто® (Bayer AG, Германия, препарат сравнения, ЛП 0), и 3 воспроизведенных препарата, выбранных случайным образом, содержащих микронизированную (ЛП 1 – Арриксардо, как и референс-препарат) и немикронизированную фармацевтическую субстанцию (ЛП 2 и ЛП 3). Сравниваемые препараты имели одинаковую лекарственную форму – таблетки, покрытые пленочной оболочкой. Входящие в состав вспомогательные вещества хорошо известны, практически одинаковы, потенциально не влияют на высвобождение действующих веществ из таблеток.

При проведении ТСКР руководствовались требованиями Фармакопеи Евразийского экономического союза (ЕАЭС) [11], ОФС.2.1.9.3 «Испытание на растворение для твердых дозированных лекарственных форм» и Государственной фармакопеи РФ, ОФС.1.4.2.0014 «Растворение для твердых дозированных лекарственных форм» на аппарате «Лопастная мешалка» при скорости вращения 75 об/мин и температуре 37,0±0,5°С в трех средах растворения: 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты (рН 1,2), ацетатном буферном растворе (рН 4,5) и фосфатном буферном растворе (рН 6,8) объемом 900–1000 мл. При испытании препаратов ЛП 0 и ЛП 1 (дозы 10, 15 и 20 мг) в среде c pH 4,5 добавлен натрия лаурилсульфат. При проведении ТСКР препарата ЛП 2 натрия лаурилсульфат добавлен во все среды растворения для всех доз [12].

В каждый из 12 сосудов аппарата помещали по одной таблетке исследуемого препарата. Пробы объемом 10–20 мл отбирали через 5, 10, 15, 20, 30 и 45 мин после начала эксперимента, фильтровали через мембранный фильтр, отбрасывая первые 2–5 мл фильтрата. Количество высвободившегося ривароксабана определяли с помощью валидированной методики методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием.

В статье использованы как собственные результаты исследования, так и данные, полученные из открытых источников [12–14].

Результаты

Критерий быстроты растворения – переход 85% и более активного вещества в раствор за 15 мин. В этом случае профили растворения [кривые зависимости количества перешедшего в среду растворения вещества (в процентах) от времени] сравниваемых препаратов считаются эквивалентными без дополнительной математической обработки данных. Если в течение 15 мин в раствор переходит менее 85% лекарственного средства, рассчитывается коэффициент подобия (фактор сходимости, f2). Если его значения находятся в пределах от 50 до 100, профили растворения считают эквивалентными [10].

Критерий растворения более 85% за 15 мин в ТСКР говорит о том, что препарат настолько быстро и полно растворяется, что его эквивалентность оригинальному средству считается практически гарантированной и с очень высокой вероятностью он будет также быстро и полно растворяться в желудочно-кишечном тракте человека. Следовательно, действующее вещество быстро высвободится и будет доступно для всасывания в кровоток. Процесс идет настолько быстро, что технологические нюансы нивелируются [15].

Сравнение значений коэффициентов подобия (f2) профилей растворения всех сравниваемых препаратов во всех дозировках в трех средах позволяет говорить об их подобии оригинальному препарату (табл. 1). Наиболее высокие значения коэффициента подобия отмечались у препарата ЛП 1 (Арриксардо), особенно у дозировок 10, 15 и 20 мг [14].

 

Таблица 1. Коэффициенты подобия (f2) профилей растворения ривароксабана из таблеток в различных средах (препарат сравнения ЛП 0)

Table 1. Similarity coefficients (f2) of rivaroxaban tablet dissolution profiles in different media (DP 0 is the reference drug)

Среда растворения	ЛП 1		ЛП 2		ЛП 3
	f2	подобие	f2	подобие	f2	подобие
2,5 мг
0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (рН 1,2)	51,9	да	54,4	да	54,0	да
Ацетатный буферный раствор (pH 4,5)	–	да	–	да	59,5	да
Фосфатный буферный раствор (рН 6,8)	–	да	66,5	да	62,9	да
10 мг
0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (рН 1,2)	73,6	да	57,1	да	56,1	да
Ацетатный буферный раствор (pH 4,5)	–	да	–	да	61,4	да
Фосфатный буферный раствор (рН 6,8)	77,4	да	71,5	да	60,4	да
15 мг
0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (рН 1,2)	66,9	да	56,2	да	54,1	да
Ацетатный буферный раствор (pH 4,5)	–	да	–	да	56,5	да
Фосфатный буферный раствор (рН 6,8)	62,0	да	68,7	да	51,9	да
20 мг
0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (рН 1,2)	85,9	да	59,2	да	87,0	да
Ацетатный буферный раствор (pH 4,5)	–	да	–	да	94,0	да
Фосфатный буферный раствор (рН 6,8)	97,5	да	68,0	да	83,5	да

Примечание. «–» – коэффициент подобия не рассчитывали, так как за 15 мин в этих средах высвободилось более 85% вещества.

Note. “–“ – the similarity coefficient was not calculated, as more than 85% of the drug substance was released in these media within 15 minutes.

 

В то же время исследуемые препараты отличались по скорости высвобождения действующего вещества. На рис. 1–3 приведены результаты высвобождения ривароксабана из воспроизведенных препаратов ЛП 1, 2, 3 по сравнению с оригинальным препаратом ЛП 0 к 15-й минуте испытания.

 

Рис. 1. Среднее количество ривароксабана, перешедшее в 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты из сравниваемых лекарственных препаратов.

Fig. 1. The mean amount of rivaroxaban released into a 0.1 M hydrochloric acid solution from the compared drugs.

 

Рис. 2. Среднее количество ривароксабана, перешедшее в ацетатный буферный раствор (рН 4,5) из сравниваемых лекарственных препаратов.

Fig. 2. The mean amount of rivaroxaban released into an acetate buffer solution (pH 4.5) from the compared drugs.

 

Рис. 3. Среднее количество ривароксабана, перешедшее в фосфатный буферный раствор (рН 6,8) из сравниваемых лекарственных препаратов.

Fig. 3. The mean amount of rivaroxaban released into a phosphate buffer solution (pH 6.8) from the compared drugs.

 

Установлено, что в условиях эксперимента с наибольшей скоростью ривароксабан переходил в раствор 0,1 М хлористоводородной кислоты и фосфатный буферный раствор из таблеток ЛП 2 (дозировки 15 и 20 мг): к 15-й минуте высвободилось около 60 и 80% вещества соответственно (см. рис. 1 и 3). Количество ривароксабана, перешедшее в эти среды из ЛП 1, 3, существенно не отличалось от такового из препарата сравнения.

В ацетатный буферный раствор из препаратов ЛП 1 и ЛП 2 к 15-й минуте высвободилось количество ривароксабана, сопоставимое с таковым из препарата сравнения ЛП 0 (см. рис. 2). В этой же среде с меньшей скоростью ривароксабан высвобождался из таблеток ЛП 3 дозировок 10, 15 и 20 мг: к 15-й минуте его количество достигало 68,0, 56,5 и 40,0% соответственно.

Интересно отметить уменьшение скорости растворения ривароксабана в кислой и щелочной средах из всех исследованных препаратов всех дозировок (см. рис. 1 и 3).

Обсуждение

В проведенном исследовании эквивалентность in vitro оценивали по ТСКР в 3 средах растворения с рН 1,2, 4,5 и 6,8, имитирующих разные условия кислотности пищеварительного тракта, через которые проходит препарат при пероральном приеме. Среда с pH 4,5 (ацетатный буферный раствор) – также стандартная для контроля качества таблеток ривароксабана по тесту «Растворение» на производстве [16, 17]. В эту среду добавлен натрия лаурилсульфат в соответствии с условиями, определенными Решением Совета Евразийской экономической комиссии №85 от 03.11.2016 «Об утверждении правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза» [10].

Ривароксабан по своим физико-химическим свойствам относится к II классу по биофармацевтической классификации [18], т.е. отличается низкой растворимостью и хорошей проницаемостью. При проведении тестирования таких препаратов в среду растворения допускается добавление поверхностно-активных веществ (ПАВ), например натрия лаурилсульфата. ПАВ имитируют физиологические условия кишечника, где природные ПАВ (желчные соли и фосфолипиды) способствуют улучшению растворения и абсорбции вещества. Обычно ПАВ добавляют в среду с pH 4,5 для достижения лучших условий растворения, что обеспечивает более стабильный профиль растворения [16–19]. ПАВ добавляют только в определенную среду контроля качества таблеток ривароксабана (pH 4,5), где концентрация и тип ПАВ оптимально подобраны для достижения репрезентативного и стандартизированного результата, учитывая физиологические и фармакопейные требования [20].

Следует обратить внимание, что при проведении ТСКР для препарата ЛП 2 натрия лаурилсульфат добавлен во все среды растворения, что может существенно изменить растворимость субстанции из-за образования мицелл и снижения поверхностного натяжения среды, искажающего истинные свойства препарата в физиологических условиях. По-видимому, добавление ПАВ послужило причиной более быстрого растворения субстанции из этого препарата по сравнению с другими в кислой и щелочной средах (см. рис. 1, 3). При сравнении воспроизведенных препаратов с референтным в условиях in vitro необходимо соблюдение корректной методологии для интерпретации данных в перспективе клинического применения препаратов.

Один из способов решения проблемы низкой растворимости активного вещества – уменьшение размера его частиц с помощью микронизации для увеличения их площади поверхности и, таким образом, облегчения растворения. Необходимость микронизации активного вещества подтверждена путем сравнения профилей растворения микронизированных и немикронизированных (кристаллических) партий ривароксабана [21]. Уменьшение размера частиц ривароксабана путем микронизации повышало его растворимость и скорость растворения, что может улучшить его биодоступность по сравнению с немикронизированной (кристаллической) формой. Это имеет решающее значение, поскольку биодоступность ривароксабана при приеме внутрь зависит от его растворимости [21].

Скорость растворения ривароксабана из ЛП 1 (Арриксардо) подобна скорости растворения препарата сравнения (ЛП 0, Ксарелто®) всех дозировок и во всех средах, что, по-видимому, обеспечивается использованием, как и в оригинальном препарате, микронизированной субстанции действующего вещества. Более мелкий размер частиц способствует ускорению растворения ривароксабана и его высвобождения из таблетки в физиологических условиях. Применением немикронизированной субстанции можно объяснить и более медленное высвобождение ривароксабана из препарата ЛП 3.

Заключение

Результаты сравнения показали, что профили растворения исследованных воспроизведенных препаратов ривароксабана подобны таковым референс-препарата, однако отмечена разная скорость высвобождения субстанции из таблеток. Скорость растворения ривароксабана из препарата ЛП 1 и препарата сравнения ЛП 0 не отличалась, что обусловлено использованием аналогичной по форме микронизированной субстанции. Ее применение может обеспечить препарату ЛП 1 эквивалентные референтному препарату скорость и степень растворения и предопределить высокую воспроизводимость фармакокинетических параметров в клинических условиях. Кроме того, входящие в состав препарата ЛП 1 вспомогательные вещества идентичны таковым оригинального препарата. Высокая сопоставимость с оригинальным препаратом позволяет сделать вывод о стабильном клиническом эффекте препарата, выражающемся в надежной профилактике тромботических осложнений у различных групп пациентов. Результаты следует учитывать при выборе препаратов ривароксабана.

Раскрытие конфликта интересов. Авторы заявляют об отсутствии личных, профессиональных или финансовых отношений, которые могли бы быть расценены как конфликт интересов в рамках данного исследования. Независимость научной оценки, интерпретации данных и подготовки рукописи сохранялась на всех этапах работы, включая этап финансирования проекта со стороны компании ОАО «Фармстандарт-Лексредства».

Disclosure of interest. The authors declare no personal, professional, or financial relationships that could be regarded as a conflict of interest for this study. The independence of the scientific assessment, data interpretation, and manuscript writing was maintained at all stages of work, including the stage of financing by the company Phs-Leksredstva JSC.

Вклад авторов. Авторы декларируют соответствие своего авторства международным критериям ICMJE. И.Е. Смехова – написание – первоначальный вариант, методология, формальный анализ, визуализация; С.В. Оковитый – концептуализация, написание – рецензирование и редактирование.

Authors’ contribution. The authors declare the compliance of their authorship according to the international ICMJE criteria. I.E. Smekhova – writing – initial version, methodology, formal analysis, visualization; S.V. Okovityi – conceptualization, writing – reviewing and editing.

Источник финансирования. Материал подготовлен при финансовой поддержке компании ОАО «Фармстандарт-Лексредства». Спонсор не участвовал в сборе, анализе данных, интерпретации результатов. При подготовке рукописи авторы сохранили независимость мнений.

Funding source. The paper was prepared with the financial support of the company Phs-Leksredstva JSC. The sponsor was not involved in the data collection and analysis and the interpretation of results. In preparing the manuscript, the authors maintained the independence of opinion.

Раскрытие информации об использовании ИИ. При написании статьи ИИ не использовался.

Disclosing the use of AI. No AI was used when writing the article.

About the authors

Irina E. Smekhova

Saint Petersburg State Chemical-Pharmaceutical University

Email: Sergey.Okovity@pharminnotech.com
ORCID iD: 0000-0002-0013-4784

D. Sci. (Pharm.), Assoc. Prof.

Russian Federation, Saint Petersburg

Sergey V. Okovityi

Saint Petersburg State Chemical-Pharmaceutical University

Author for correspondence.
Email: Sergey.Okovity@pharminnotech.com
ORCID iD: 0000-0003-4294-5531

D. Sci. (Med.), Prof.

Russian Federation, Saint Petersburg

References

Supplementary files