Issledovanie stepeni uroselektivnosti preparata Omnik (tamsulozin) i ego genericheskikh analogov

Full Text

Введение В течение последних лет наблюдается стойкая всемирная тенденция увеличения доли генерических лекарственных средств на фармацевтическом рынке [1]. Напомним, что генерическими, или воспроизведенными, препаратами называются лекарственные средства, идентичные во всех отношениях оригинальному препарату, по качеству и количеству составляющих ингредиентов, дозировке и биоэквивалентности, которые производятся без лицензии компании-производителя оригинального препарата и выпускаются на рынок после истечения срока патентной защиты или других эксклюзивных прав. Оригинальный препарат – это впервые синтезированное и прошедшее полный цикл доклинических и клинических исследований лекарственное средство, представляющее собой несомненный шаг вперед в какой-либо фармакотерапевтической группе. Процесс его создания очень дорогостоящий, поскольку начинается с синтеза молекулы, продолжается в экспериментальных исследованиях на животных (изучается выраженность фармакологического эффекта, токсичность, мутагенность, тератогенность) и завершается испытаниями на здоровых добровольцах и пациентах, страдающих болезнью, для лечения которой создается лекарство. После окончания срока действия патента лекарство становится международным достоянием, т.е. действующее начало препарата и его лекарственные формы могут быть на законных основаниях воспроизведены другими компаниями. Конечно, оригинальные препараты воспроизводятся только в том случае, если за срок, отведенный патентной защитой, они подтвердили свою высокую эффективность и практическую ценность в клинических исследованиях и широкой клинической практике. Именно это является критерием отбора для воспроизводства другими компаниями. Эквивалентность генерических и оригинальных препаратов – актуальная проблема, дискутируемая не только фирмами-производителями (что вполне закономерно), но и практическими врачами, организаторами здравоохранения и лекарственного обеспечения. Доказательства терапевтической эффективности оригинального препарата получают в сравнении с плацебо или эталонным препаратом соответствующей фармакологической группы в крупных многоцентровых клинических исследованиях с участием сотен, а иногда и тысяч пациентов. Производство генериков, с одной стороны, позволяет снизить стоимость лекарственного препарата и повысить доступность лекарственной помощи. Однако не нужно забывать, что стоимость генериков меньше, чем бренда, за счет использования недорогих субстанций и упаковочных материалов, изменения количественного и качественного состава вспомогательных веществ, в значительной мере определяющих фармакокинетические параметры и профиль безопасности препарата [1]. Существенно более низкая стоимость генерика может быть связана с тем, что, производя генерик после окончания срока патентной защиты оригинального препарата, фирма не проводит крупных и дорогостоящих исследований по доказательству эффективности активно действующего начала [2]. В соответствии с существующим законодательством для подтверждения эффективности и безопасности генерика не требуется проведения доклинических и клинических исследований. Сегодня объем продаж воспроизведенных лекарственных препаратов в мире продолжает увеличиваться, составляя в США около 25%, в Германии 35%, в Великобритании и Венгрии по 55%, в России 78%, в Польше 61%, в Словакии 66%. Однозначно утверждать, что «засилье» генериков характерно только для развивающихся государств, нельзя, однако в постcоциалистических странах доля генерических препаратов действительно больше, чем в Западной Европе (исключение составляет Великобритания). Цель нашего исследования состояла в том, чтобы в эксперименте провести сравнительную оценку «уроселективности» оригинального препарата тамсулозина (Омник) и его генерических аналогов (Гиперпрост, Ревокарин, Тамсулон-ФС и Фокусин), так как уроселективность определяет клиническую эффективность и безопасность тамсулозина у пациентов с доброкачественной гиперплазией простаты (ДГП). Для начала несколько слов о ДГП, a-адреноблокаторах и уроселективности. Согласно данным литературы, симптомы ДГП могут проявляться в 40–50 лет [3] и обнаруживаются почти у половины мужчин, достигших 60-летнего возраста [4]. Эти данные подтверждаются и результатами гистологических исследований: признаки ДГП обнаруживаются у 50% мужчин в возрасте 60 лет и у 9 из 10 мужчин старше 80 лет [5]. В нашей стране проведенные эпидемиологические исследования показали, что в возрасте 40–49 лет частота ДГП встречается в 11% случаев, а в возрасте 80 лет распространенность заболевания достигает 81% [3]. Более ста лет назад были предприняты первые попытки хирургического лечения ДГП, и в настоящее время в распоряжении урологов имеется большое количество методов оперативной коррекции нарушения мочеиспускания при ДГП. «Золотым стандартом» хирургического лечения ДГП во всем мире является трансуретральная резекция предстательной железы (ТУРП). Имеющиеся у нас сегодня данные красноречиво свидетельствуют, что даже хорошо выполненная ТУРП не всегда оправдывает ожидания пациентов, может сопровождаться грозными интрои послеоперационными осложнениями и не гарантирует больного от необходимости повторной операции по прошествии некоторого времени [5]. В последние годы медикаментозная терапия расстройств мочеиспускания, обусловленных ДГП, находит все более широкое применение. С одной стороны, это связано с появлением новых лекарственных препаратов, а с другой – с расширением показаний к медикаментозной терапии и одновременной возможностью наблюдения за больными. В настоящее время препаратами первого выбора медикаментозной терапии больных с ДГП, сопровождающейся симптомами нарушения мочеиспускания (СНМП), являются a1-адреноблокаторы (a1-АБ). Эффективность и безопасность лечения этой группой препаратов доказана в многочисленных международных и отечественных рандомизированных многоцентровых клинических исследованиях в течение более 10 лет [6]. a-Адреноблокаторы (a-АБ) воздействуют на a-адренорецепторы (a-АР) и, оказывая блокирующее влияние, улучшают симптомы динамической обструкции, лежащие в основе жалоб пациентов с ДГП. С помощью фармакологических и молекулярно-биологических исследований ученым удалось выделить три подтипа a1-АР: a1A, a1B и a1D. a1A-Адренорецепторы расположены в ткани предстательной железы и простатической части уретры и составляют около 70% всех a1-АР в этой области. a1D-АР расположены в мочевом пузыре и иннервирующих его органах. a1B-Подтип расположен в стенках крупных кровеносных сосудов. Таким образом, селективность препарата к a1A-подтипу адренорецепторов (иначе говоря, его уроселективность) определяет положительный эффект при лечении ДГП. Активностью a1B-подтипа объясняются колебания артериального давления (АД) и, соответственно, наличие побочных эффектов при применении препаратов этой группы у урологических больных. Чем выше сродство препарата к a1A-подтипу адренорецепторов, тем больше его уроселективность [6]. Исследования по изучению селективных подтипов a1-рецепторов способствовали появлению нового препарата из группы a-АБ, характеризующегося суперселективным действием на a1A-подтип рецепторов, – тамсулозин. Обладая равной эффективностью с другими препаратами этой группы, тамсулозин лишен гипотензивного эффекта, что является причиной меньшего количества побочных воздействий, возникающих на фоне его применения. Эта особенность позволяет назначать тамсулозин без предварительного титрования дозы, необходимой большинству a1-АБ [7]. Тамсулозин: краткая фармакокинетическая характеристика Тамсулозин снижает тонус гладкой мускулатуры предстательной железы, шейки мочевого пузыря, простатической части уретры, улучшает отток мочи, уменьшает симптомы обструкции и раздражения мочевыводящих путей при ДГП. Терапевтический эффект препарата развивается через 2 нед. Это достигается за счет селективной блокады постсинаптических a1А-АР гладкой мускулатуры предстательной железы, шейки мочевого пузыря и простатической части уретры. Способность блокировать a1А-АР в 20 раз больше по сравнению с действием на a1B-АР гладкой мускулатуры сосудов (влияние на системное АД незначительно). После приема внутрь тамсулозин практически полностью всасывается из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) – абсорбция более 90%. Связывание с белками плазмы крови (преимущественно с a1-гликопротеином) составляет 94–99%, распределяется по объему крови и внеклеточной жидкости (объем распределения 0,2 л/кг). Медленно биотрансформируется в печени при участии цитохрома Р-450 с образованием активных метаболитов (сохраняют селективность к a1А-АР), в плазме циркулирует в основном в неизмененном виде. Т1/2 – 9–13 ч у здоровых добровольцев, 14–15 ч – у пациентов при лечении. Прием пищи увеличивает биодоступность и величину Cmax, уменьшает время достижения Cmax. Cmax достигается через 4–5 ч (при приеме натощак) или 6–7 ч (при приеме вместе с пищей). Равновесная концентрация устанавливается к 6-му дню курсового приема, ее пиковые значения на 60–70% превышают Cmax после однократного приема внутрь. Выводится преимущественно почками в виде конъюгатов метаболитов с глюкуроновой и серной кислотами (10% – в неизмененном виде), частично – с фекалиями [8]. Материалы и методы Фаза 1 этого исследования состояла в том, чтобы в эксперименте провести сравнительную оценку уроселективности оригинального препарата тамсулозина (Омник) и его генерических аналогов (Гиперпрост, Ревокарин, Тамсулон-ФС и Фокусин), так как уроселективность определяет клиническую эффективность и безопасность тамсулозина у пациентов с ДГП. Селективность тамсулозина к a1-АР и конкретно a1Aa1D-подтипам была доказана в ряде экспериментальных исследований [9]. В фазе 1 нашего исследования мы сравнивали показатели относительного сродства избирательных антагонистов тамсулозина к a-АР и величину константы ингибирования на ткани простаты и аорты крыс. Фаза 2. В фазе 2 оценивали сравнительную способность тестируемых образцов тамсулозина вытеснять меченый празозин из комплекса с a1-АР биоптатов пациентов. В работе был использован биопсийный материал 25 пациентов с ДГП. Цель этого исследования заключалась в том, чтобы оценить параметры специфического связывания лигандов a-АР биоптатов простаты пациентов с ДГП с оригинальным препаратом тамсулозина (Омник), ЗАО «Астеллас Фарма» и генерических препаратов тамсулозина. Экстрагирование активного вещества (тамсулозина) из капсул Каждую капсулу исследуемых препаратов (А – Е) помещали в 50 мл среды растворения, предварительно термостатированной при температуре 37±0,5°С. Здесь и далее тамсулозин, полученный из исследуемых препаратов, обозначен следующим шифром: (А) – Омник; (B) – Гиперпрост; (C) – Ревокарин; (D) – Тамсулон-ФС; (E) – Фокусин. Через 5 ч после начала инкубации отбирали аликвоты по 1 мл раствора. Скорость вращения мешалки 100 об/мин. Объем среды растворения 50 мл. Температура среды растворения 37±0,5°С. Среда растворения: 6,8 г однозамещенного фосфата калия и 1,4 г натрия гидроксида на 100 мл бидистиллированной воды. Доводят объем раствора до 1000 мл и перемешивают. Получают раствор, значение рН которого составляет около 7,2. Количество тамсулозина, перешедшего в среду растворения, определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Оценка специфического связывания лигандов a-АР Гомогенаты ткани простаты крыс инкубировали в присутствии различных концентраций [H3] празозина в среде, содержащей Tris-HCl буфер 50 mM (pH 7,5), в течение 30 мин при 25°С по методу, описанному S.Yamada и соавт. (J Pharmacol Exp Ther 1987; 242: 326–30). Реакцию останавливали путем фильтрации на Whatman GF/B. Специфическое связывание меченого празозина определяли как разность между радиоактивностями проб с наличием и без 10 мкМ фентоламина. В работе использован [H3] Prazosin (3,03 TBq/mmol) производства компании «Dupont-NEN». Определение относительного сродства избирательных антагонистов исследуемых a-АР (X) Оккупацию a-АР исследуемыми соединениями рассчитывали по формуле: RO (%) = [(Bmax(control) – Bmax(X)/Bmax(control)]і100, где Х – исследуемое вещество. Величину константы ингибирования (Ki) вычисляли по формуле: Ki = IC50/1+L/Kd), где IC50 – концентрация исследуемого образца (Х), при которой количество комплексов празозина с АР составляет 50% от контрольных значений (в отсутствие в среде инкубации Х); L – равновесная концентрация меченого празозина; Kd – равновесная константа диссоциации комплекса празозин–АР, равная 68±10 nМ. Результаты Фаза 1 В первой серии экспериментов определяли избирательную связывающую способность – этот показатель отражает способность препаратов тамсулозина селективно связываться с a1-АР. Для этого использовали две тест-системы: в одной объектом исследования служил гомогенат ткани простаты крыс (a1A-АР), в другой – гомогенат ткани грудной аорты крысы (a1В-АР). Полученные результаты представлены в табл. 1. Как видно из формулы вычисления Ki, существует прямая зависимость между концентрацией препарата, при которой количество комплексов празозина с АР составляет 50% от контрольных значений, и величиной константы ингибирования (Ki). То есть, чем больше концентрация препарата, необходимая для вытеснения празозина из связи с рецепторами, тем выше значение Ki и меньше сродство препарата к a1A-АР. И, соответственно, чем меньше значение Ki, тем более выражен показатель сродства тамсулозина к a1A-АР. Как продемонстрировано на рисунке, минимальное значение Ki и, соответственно, большее значение уроселективности характерно для Омника, а наименьшее – для Фокусина. Видно, что все изученные образцы проявляют высокую тропность по отношению к a1А-подтипу АР простаты – значения Ki в первой тест-системе (образцы ткани простаты – a1A-АР) в 2–3 раза меньше, чем во второй тест-системе (ткань аорты – a1В-АР). Другими словами, аффинитет к a1В-подтипу АР гладкомышечных клеток аорты исследуемых соединений значительно ниже. Во второй серии экспериментов оценивали сравнительную способность тестируемых образцов вытеснять меченый празозин из комплекса с a1-АР простаты и аорты. Экспериментальные данные суммированы в табл. 2. При оценке относительной связывающей способности степень оккупации a1A-АР будет тем выше, чем больше значение RO. Соответственно, как показано на рисунке, наибольшей степенью оккупации a1A-АР обладает Омник, меньшие значения характерны для Гиперпроста, Ревокарина и Тамсулона и наименьшей аффинностью обладает Фокусин. Установлено, что способность изученных образцов вытеснять празозин в различных тест-системах существенно отличается. В зависимости от избирательной связывающей активности, оцениваемой по величине RO, исследуемые образцы располагаются в ряду (простат крыс): Омник > Тамсулон-ФС > Гиперпрост > Ревокарин > Фокусин. На аорте крыс достоверных отличий величины относительной связывающей способности не получено. По результатам проведенного исследования были сделаны следующие выводы: 1. Все исследуемые образцы обладают тропностью по отношению к a1А-подтипу АР простаты крыс. 2. Сродство исследуемых образцов к АР простаты крыс, оцениваемое по величине Ki, находится в диапазоне 2,2–3,2 нМ, достоверные отличия не отмечены. 3. В зависимости от избирательной связывающей активности, оцениваемой по величине RO, исследуемые образцы располагаются в ряду: Омник > Тамсулон-ФС > Гиперпрост > Ревокарин > Фокусин. 4. В опытах in vitro исследуемые образцы имеют сходный аффинитет к a1А-рецепторам простаты крыс, но отличаются по способности конкурентно вытеснять меченый празозин их комплекса с АР. Полученные данные свидетельствуют о возможных различиях фармакологической эффективности тестируемых препаратов тамсулозина в условиях in vivo. Фаза 2 Как известно, результаты экспериментальных исследований, выполненных на животных, не всегда могут быть экстраполированы на человеческую популяцию. Поэтому проведенное экспериментальное исследование рассматривалось нами как пилотный проект, и сразу после получения первых результатов, нами было запланировано проведение исследования по изучению взаимодействия a1A-АР биоптатов простаты пациентов с ДГП с оригинальным и генерическими препаратами тамсулозина. Цель этого исследования заключалась в том, чтобы оценить параметры специфического связывания лигандов a-АР биоптатов простаты пациентов с ДГП с оригинальным препаратом тамсулозина – Омник (ЗАО «Астеллас Фарма») и генерических препаратов тамсулозина – Ревокарин («Фармпроект», Россия), Фокусин («Зентива», Чешская Республика), Гиперпрост («МакизФарма», Россия) и Тамсулон-ФС (Фармсинтез», Россия)». При оценке относительной связывающей способности степень оккупации a1A-АР будет тем выше, чем больше значение RO. Соответственно, как видно из приведенных в табл. 3 результатов, наибольшей аффинностью к a1A-АР обладает оригинальный препарат Омник. В зависимости от уровня простатоспецифического антигена (ПСА) пациенты были разделены на 3 группы, полученные данные суммированы в табл. 3. Максимальное из исследованных образцов сродство тамсулозина (Омник) отмечено во всех трех группах больных. В группе пациентов с ДГП и уровнем ПСА<4 нг/мл значение относительной связывающей способности, отражающей степень оккупации a1A-АР было максимальным для Омника, достоверные отличия были получены при сравнении Омника с Гиперпростом и Ревокарином. Во второй группе пациентов с уровнем ПСА в пределах 4,0–10 нг/мл наибольшее значение степени оккупации a1A-АР также было характерно для Омника. У Омника было выявлено достоверно более высокое значение относительной избирательной способности по сравнению с Гиперпростом и Ревокарином (см. рисунок). В третью группу включали пациентов со значением ПСА>10 нг/мл. Достоверных отличий между препаратами получить не удалось, что, вероятно, обусловлено малым числом выборки. Однако сохранялась выявленная ранее тенденция – максимальное значение аффинности тамсулозина к a1A-АР было вновь показано для оригинального препарата. Таким образом, результаты проведенного исследования позволили нам сделать вывод о том, что максимальная избирательная связывающая способность во всех трех группах была у оригинального препарата Омник по сравнению с остальными генерическими препаратами тамсулозина. В зависимости от избирательной связывающей активности, оцениваемой по величине RO, и уровня ПСА, исследуемые образцы тамсулозина располагались в ряду: ПСА<4,0 нг/мл: А>E>D>C>B; 4,0≤ПСА<10 нг/мл: A>E>D>B>C; ПСА≥10,0 нг/мл: A>D>E> B>C. Заключение Увеличение доли генерических препаратов на современном фармацевтическом рынке наряду с их ценовой привлекательностью заставляет искать пути рациональной оценки сопоставимости оригинальных лекарственных средств, которые с максимальной степенью достоверности могли бы свидетельствовать о высоком качестве воспроизведенного образца. Известно, что изучение только биологической эквивалентности не всегда свидетельствует о сопоставимой терапевтической эквивалентности препарата и сходном профиле его безопасности. Проведение крупномасштабных клинических исследований по изучению сравнительной эффективности оригинального препарата и его генериков не всегда возможно. Одной из альтернатив может являться изучение сродства препаратов к рецепторам. Проведенная серия сравнительных исследований по изучению связывания препаратов тамсулозина (оригинального препарата Омник и его генериков) с a-АР позволила установить различия в уроселективности препаратов тамсулозина. Для оригинального препарата тамсулозина Омник было характерно максимальное сродство к a1A-АР как по показателю относительной связывающей активности тамсулозина, так и по значениям константы ингибирования. Очевидно, что для большей клинической значимости научных результатов необходимо проведение дальнейших исследований с изучением уроселективности действия препаратов тамсулозина у пациентов с ДГП в условиях in vivo.

About the authors

D. Yu Pushkar'

Yu. B Belousov

P. I Rasner

A. S Dukhanin

O. A Maneshina

References

Supplementary files